[摘要] 目的 探讨电针与小剂量锌合用对帕金森病模型大鼠体内抗氧化酶系统的调节作用。 方法 选取SD大白鼠100 只，将6-羟基多巴胺注入中脑右侧黑质制备单侧黑质损毁的PD大鼠模型， 将模型大鼠随机分成模型组、0 Hz组和120 Hz电针组、120 Hz+锌组和锌组，另有假手术对照组，共6组，治疗或观察6个星期，观察治疗前后PD模型大鼠行为学变化、黑质超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）的变化。 结果 与模型组比较， 120 Hz+锌组大鼠损毁侧SOD、NO含量明显增加，MDA含量明显减少（P ＜ 0.01）；在行为学方面，120 Hz+锌组大鼠的运动平衡能力比模型组明显增强（尤其是前4周，P ＜ 0.01）；其黑质TH阳性神经元形态学方面也有明显改善。 结论 电针与小剂量锌合用对帕金森病大鼠体内抗氧化酶系统具有协同调整作用，并可明显改善行为学和黑质细胞形态。
[关键词] 电针；锌；帕金森病；黑质超氧化物歧化酶；一氧化氮；丙二醛
[中图分类号] R2-03[文献标识码] A[文章编号] 1673-7210（2012）03（c）-0027-04
Effects of electroacupuncture combined with small doses of Zinc on SOD，NO，MDA in the model rats with Parkinson"s disease
SHI Bo1 YANG Rong1 TIAN Weizhen1 LIU Haixia1 KONG Dexiang1 LIU Changjin2
1.Hubei College of Traditional Chinese Medicine, Hubei Province, Jingzhou 434020, China; 2.Department of Physiology, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Hubei Province, Wuhan 430030, China
[Abstract] Objective To investigate regulative action of electroacupuncture (EA) combined with small doses of Zinc on anti-oxidant enzyme system in the mesencephalic substantia nigra (MSN) of rats with Parkinson"s disease (PD). Methods 100 SD rats were selected, a model of PD with one side MSN damaged was induced in rats by injecting 6-hydroxydopamine (6-OHDA) into the MSN of right side rats. The model rat will be randomly divided into a model group which received no EA, the electroacupuncture group, 0 Hz group with only insertingtheneedle and not energization, and 120 Hz group treated by the electroacupuncture, 120 Hz+Zinc group and Zinc group, with a Sham-operation group set up. A total of 6 groupswere treated or observed for 6 weeks. During the treatment, the changes of behavior were investigated. After 6 weeks, malondialdehyde(MDA) and nitric oxide (NO) contents and superoxide dismutase (SOD) activity in the MSN were detected. Results In 120 Hz+Zinc group, NO contents and SOD activity in the MSN were significantly higher, and MDA contents were significantly decreased (P ＜ 0.01), and in aspect of behavior the balance ability of movement in rats significantly enhanced (especially the first 4 weeks， P ＜ 0.01), and the form of MSN cell had significant improvement compared with MFB group. Conclusion Electroacupuncture (EA) combined with small doses of Zinc may have regulative action synergistically on anti-oxidant enzyme system in the Parkinson"s disease rats, which make behavior and the form of MSN cell have significant improvement.
[Key words] Electroacupuncture; Zinc; Parkinson"s disease; SOD; NO; MDA
帕金森病（PD）是一种中老年常见的持续加重的中枢神经系统退行性疾病，其病理改变是中脑黑质-纹状体通路中多巴胺（DA）的缺失，临床表现以肌强直、肢体震颤、运动减少和姿势反射障碍等症状为主要特征。尽管PD的病因仍不十分清楚，但氧化应激过度与自由基毒性对该病的形成无疑起了重要作用。据报道，电针在治疗PD模型大鼠和PD患者时均表现出抗氧化作用[1-3]，为治疗PD的安全、有效、经济的辅助方法[4]。锌是一种副作用小、价格便宜的微量元素，是机体重要的营养素，锌本身也是一种抗氧化物质[5]。现己证明锌参与体内300余种酶和功能蛋白的组成。另外，锌还是许多功能蛋白如金属硫蛋白、核蛋白、受体等的组成成分[6]，锌具有广泛的生理和生化功能。因此，笔者通过电针与小剂量锌合用，试图了解它们对PD模型大鼠置质超氧化物岐化酶（SOD）、一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）的影响，探讨它们治疗帕金森病的抗氧化协同作用和潜在机制以及一种价廉、安全、有效的新型治疗方法。
1 材料与方法
1.1 实验动物
取体重200~250 g成年SD大鼠100 只，雌雄各半，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供（合格证：医动字第00018516号）。
1.2 仪器、主要药物与试剂
脑立体定位仪、疲劳转棒仪、HANS LY257 恒流电针仪、台式高速冷冻离心机、执笔式牙科钻（上海江湾医疗器械厂），XHF-1高速分散器十万分之一电子天平（上海金达生化仪器厂），日立850 model荧光分光光度计（日本日立公司产），-70 ℃超低温冰箱，温箱及烤箱，光学显微镜（日本岛津）；6-羟基多巴胺（6-OHDA，美国Sigma 公司）、戊巴比妥钠、阿朴吗啡溶液（5 mg/2mL/kg 体重），PBS 试剂，DAB，TH抗体，ABC试剂盒，MDA、SOD、NO试剂盒，二甲苯，树脂，硫酸锌等均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。
1.3 实验方法
1.3.1 造模方法与分组
100 只大鼠随机分为假手术对照组（假手术组或Sham组，每组10只）和模型组（9只）。造模方法：将拟造模大鼠以1%戊巴比妥钠40 mg/kg 腹腔注射麻醉后，常规备皮消毒，切开皮肤，将大鼠颅腹卧位居中固定于大鼠脑立体定位仪上。根据包新民等[7]著大鼠脑立体定向图谱确定右侧黑质定位坐标为：前囟后 3.5 mm ，矢状线右侧旁开 2.5 mm ，硬膜下深 7.5 mm。标记点坐标，用执笔式牙科钻钻透颅骨，牙科探针穿透硬膜。用微量注射器将4 μL（4 μg/μL）6-OHDA（溶于含0.2%抗坏血酸的生理盐水中）注入上述位点各2 μL，缓慢进针，注射速度0.5 μL/min，注射完毕留针10 min后，以1 mm/min 的速度退针，明胶海绵填塞颅骨孔，颅骨表面局部洒少量青霉素粉剂，缝合皮肤，碘酒擦拭缝合处。假手术组立体定位下注射等量生理盐水（内含0.2%维生素C）。术后抗炎3 d。术后2周，给造模大鼠腹腔注射APO（0.5 mg/kg），诱导旋转行为，以每分钟旋转不低于7次者为成功模型。造模前后死亡和不合格31只。除①Sham组外，共将合格模型大鼠59只再次随机分为②模型组（MFB组）、③只扎针不通电组（0 Hz组）、④120 Hz电针治疗组（120 Hz组）、⑤120 Hz+锌组和⑥锌组。除了MFB组9只，其余每组均为10只。
1.3.2 治疗方法
动物在同等条件下（室温20℃，相对湿度45%）普通饲养。参照华兴邦[8]制订的实验动物穴位图谱，120 Hz组、120 Hz+锌组取百会、命门穴，用13 mm的毫针针刺，接HANSLY 257恒流电针仪，采用连续波，频率为120 Hz，刺激强度以大鼠腿部轻微抽动为度（2~6 mA）。每次30 min，每天1次，2周为1个疗程，疗程间休息1 d，共治疗3个疗程。120 Hz+锌组和锌组的饲料中含小剂量硫酸锌[9]（120 mg锌/kg饲粮，即在基础饲料[9]（经原子吸收光度计检测，含锌量为20.0 mg/kg）的基础上以硫酸锌的形式（100 mg锌/kg饲粮）添加锌到饲料中，每只大鼠每天的饲粮量按25 g供给。饲粮一次性配好。Sham组和MFB 组不给予治疗。
1.3.3 检测指标及方法
1.3.3.1 各组大鼠行为学检测转棒试验：治疗观察2周后，每隔1周，进行行为学观察。将大鼠放在转棒上，启动转棒，开始计时（由计算机完成），大鼠为保持平衡而跟随转棒运动，逐渐增加转棒转速，观察大鼠运动，直至大鼠从转棒上掉落，结束计时。从计时开始，到大鼠落地计时结束的时间愈长，大鼠行为学的改善愈好。
1.3.3.2 各组大鼠右侧黑质丙二醛、一氧化氮含量和超氧化物歧化酶活性测定最后1次行为检测后迅速处死动物，断头取脑，置于冰盘上分离右侧黑质，置于-70℃ 冰箱保存备用。取一半黑质采用手工匀浆法制成100 g/L组织匀浆， MDA、NO含量和SOD活性的测定均按北京中杉金桥试剂盒说明书步骤，用分光光度计检测；另一半用10%的多聚甲醛固定，进行黑质形态学观察。
1.3.3.3 取材、切片，光镜观察黑质TH阳性细胞形态学变化用10%的多聚甲醛固定黑质，石蜡切片，常规脱蜡至水后，TH 免疫组化染色步骤按北京中杉金桥ABC试剂盒的说明进行。在光镜下观察黑质TH阳性细胞的形态和数量并拍片。结果判定：经染色后TH阳性细胞胞浆为棕褐色。
1.4 统计学方法
所有数据应用SPSS 13.0统计软件进行统计学处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，组间比较采用t检验，计数资料采用百分率表示，组间对比采用χ2检验。以P 综上所述，电针与小剂量锌合用对PD大鼠在增强SOD活性、增加NO和减少MDA含量以及保护黑质多巴胺神经元方面均具有协同效应。电针与小剂量锌合用对PD大鼠的治疗作用与它们调整体内抗氧化酶系统有关。但本研究中与电针合用的锌剂量是否是最佳剂量，多少剂量的锌与电针合用对PD的防治既安全又能发挥最好的效果以及它们的治疗时间和作用机制还有待深入研究。
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（收稿日期：2011-02-27 本文编辑：冯 婕）